Tecniche di osservazione in microscopia

L'osservazione in campo chiaro è la tecnica di microscopia più semplice. In questo sistema, la luce attraversa o viene riflessa dal campione, senza alcuna alterazione, oltre a quella causata dal campione stesso.

Tutta la luce del campione e dell'ambiente circostante viene raccolta dall'obiettivo per formare un'immagine su uno sfondo completamente luminoso. Questo tipo di osservazione è il più adatto per campioni colorati o con pigmenti naturali e altamente contrastati.

È ampiamente usato in patologia e istologia vegetale e animale, per l'osservazione di sezioni di tessuto sottili, il campione contrastato appare sotto uno sfondo luminoso. Tuttavia non è troppo utile per l'osservazione delle cellule viventi.

La tecnica di osservazione in campo oscuro è una tecnica di contrasto, senza luce diretta, in cui solo la luce diffratta dal campione viene utilizzata per formare l'immagine.

In questa tecnica, i campioni devono essere trasparenti e non macchiati. La luce campione deve essere controllata in modo che la luce centrale sia bloccata. L'illuminazione (grazie al condensatore) forma un cono cavo, con solo luce obliqua, che si riflette sul campione e sull'ambiente circostante. L'immagine è formata da raggi di luce dispersi dal campione e dal palcoscenico, che vengono catturati dal bersaglio.

È una tecnica adatta per l'osservazione di cellule e organismi viventi. Questo perché il contrasto è creato da un organismo luminoso su uno sfondo scuro, quindi riveliamo sfondi, bordi e contorni dell'organismo. Uno degli usi principali è in ematologia, su cellule del sangue viventi.

La tecnica del contrasto di fase corrisponde anche a una tecnica di osservazione del contrasto, indipendentemente dalla ridondanza. Ciò significa che il risultato dell'immagine sarà il frutto del passaggio della luce attraverso il campione, normalmente vivo, e dei diversi indici di rifrazione che ne derivano.

La luce proveniente da una lampada / lampadina alogena-tungsteno viene diretta attraverso una lente di raccolta e focalizzata su anelli del condensatore specializzati. I fronti delle onde che passano attraverso l'anello illuminano il campione e passano direttamente (o diffrattano) attraverso il campione e sono ritardati dai gradienti di fase del campione. La luce non diretta, diffratta e raccolta dall'obiettivo, è separata da una lastra di fase e focalizzata sul piano intermedio dell'immagine per formare l'immagine finale.

Questa tecnica viene utilizzata nell'osservazione di cellule viventi o nello studio di materiali con fogli molto sottili.

Il microscopio a fluorescenza si basa sul quale gli oggetti sono illuminati da raggi di una certa lunghezza d'onda. L'immagine osservata è il risultato della radiazione elettromagnetica emessa da molecole che hanno assorbito la radiazione primaria e riemesso la luce con una lunghezza d'onda più lunga. Voglio dire, si sono eccitati. Per passare solo l'emissione secondaria desiderata, i filtri appropriati devono essere posizionati sotto il condensatore e sopra l'obiettivo.

Quindi potremmo determinare questa tecnica di osservazione come indiretta, poiché l'osservazione o il risultato è grazie alla reazione di determinate molecole o cellule su un primo tipo di luce o radiazione che hanno assorbito.

La microscopia a fluorescenza viene utilizzata per rilevare determinate sostanze come la vitamina A o le sostanze marcate con fluorocromo. Permette anche di determinare la distribuzione di una singola specie di molecola, la sua quantità e posizione all'interno della cellula. È una tecnica molto specifica ed evoluta, ma allo stesso tempo ampiamente utilizzata nell'analisi biomolecolare.